Ход определения.
На предметное стекло камеры Горяева в том месте, где на нем находится сетка, поместить покровное стекло и тщательно прижать его большими пальцами рук до появления ньютоновых колец - окрашенных в цвет радуги полосок. Одну каплю полученной суспензии выдуть на предметное стекло под покровное.
Поместить предметное стекло на столик микроскопа, найти при малом увеличении сетку. Затем, установив большое увеличение, произвести подсчет агрегированных и неагрегированных эритроцитов.
Принцип. Определение начальной скорости фильтрации.
Подготовка к работе. Установить фильтр в стеклянную трубку.
Ход определения.
Вначале через фильтр с диаметром пор 2,0 - 4,5 мкм под действием силы тяжести пропускаем физиологический раствор (объем 1 мл) с измерением времени его движения (Тфиз) в вертикально расположенной стеклянной трубке с размещенным на ее нижнем конце фильтром, а затем образец (объем 1 мл) 2% суспензии эритроцитов в физиологическом растворе, объем эритроцитной массы в которой составляет 0,02 мл, с регистрацией также времени его движения (Тсусп).
Для приготовления нижнего и верхнего геля используют следующие исходные растворы:
Раствор А: 1 М раствор соляной кислоты - 48 мл; трис - 36,6 г.; ТЕМЭД - 0,23 мл; вода - до 100 мл (pH=8.6).
Раствор Б: 1 М раствор соляной кислоты - 48 мл; трис - 5,98 г.; ТЕМЭД - 0.46 мл; вода - до 100 мл (pH=6.7).
Раствор В: акриламид - 30 г.; бисакриламид - 0,735 г.; вода - до 100 мл.
Раствор Г: акриламид -10 г.; бисакриламид - 2,5 г; вода - до 100 мл.
Раствор Д: рибофлавин - 4,0 мг; вода - до 100 мл.
Раствор Е: сахароза - 40 г.; вода - до 100 мл.
Раствор Ж: персульфат аммония - 0,14 г.; вода - до 100 мл [48].
Процесс полимеризации геля ведут без доступа кислорода. С этой целью нижние концы сухих обезжиренных электрофоретических трубок (диаметр 0,6 см, длина 8 см) закрывают водонепроницаемыми донышками из лейкопластыря и закрепляют их парафином. Из запасных растворов, доведенных до комнатной температуры, готовят смесь для нижнего, разделительного геля. Для этого смешивают 1 часть раствора А, 2 части раствора В, 1 часть воды и 4 части раствора Ж. Эту смесь перемешивают и заливают в электрофоретические трубки (примерно 2 мл). На смесь сразу наслаивают пипеткой по стенке колонки слой свежепрокипяченной дистиллированной воды высотой примерно 8 мм. Полимеризация нижнего геля при комнатной температуре продолжается около часа. Для ускорения процесса полимеризации трубки с гелем помещают в термостат при температуре +37 0С. Полимеризация геля в термостате длится около 30 мин. Об окончании процесса полимеризации нижнего геля можно судить по появлению четкой границы между гелем и слоем воды над ним. После окончания процесса полимеризации геля с него удаляют воду и заливают в колонку смесь для верхнего геля. Для этого смешивают 1 часть раствора Б, 2 части раствора Г, 1 часть раствора Д и 4 части раствора Е. Смесь для верхнего геля наносят высотой 0,5 см, что составляет примерно 0.2 мл. На эту смесь снова наслаивают воду и ведут полимеризацию верхнего геля на солнечном свету или под УФ-лампой. Начало полимеризации определяют по переходу флуоресцирующего желто-зеленого цвета смеси в опаловый, а конец - по резкой границе между гелем и водой. Полимеризация верхнего геля длится 10-15 мин [48]. После удаления воды колонки готовы для нанесения исследуемого раствора.
Экологические проблемы нефтяных и газовых производств
Экологические
загрязнения нефтепродуктами - очень актуальная и важная тема, которая с каждым
днем напоминает о себе все больше и чаще. Каждую минуту в мире добываются
тысячи тонн нефти, и п ...
Долгосрочный экологический проект "Росток жизни" (из опыта работы в рамках долгосрочного образовательного проекта "Экологический патруль")
Наш
замечательный город Минск растет. Архитекторы и его строители среди возведённых
многоэтажек оставили "островки" дикой природы - лесопарки. Объектом
нашей тревоги стал лесопарк ...
Принципы и пути разрешения современного экологического кризиса
Актуальность
данной работы велика, так как мы, живя в современном мире, напрямую
сталкиваемся в повседневности с экологическим кризисом и его последствиями.
Наше поколение наиболее сильно и ...